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质粒载体网--4T1小鼠乳腺癌细胞的培养方法及传代!
发布时间:2022-05-20        浏览次数:9        返回列表
 一.小鼠乳腺癌细胞简介:
细胞名称:4T1小鼠乳腺癌细胞
平台编号:zl-056373

4T1是从410.4瘤株中未经诱变筛得的6-硫鸟嘌噙抗性细胞株。当注射到BALB/c小鼠中时,4T1自发产生高转移肿瘤,可转移到肺,肝,淋巴结和大脑,同时在注射部位形成始发灶。诱导转移时不需要摘除始发灶。4T1细胞在BALB/c小鼠中的生长与转移特性与人体中的乳腺癌十分相近。这种肿瘤是人VI期乳腺癌的动物模型。
4T1-诱导的肿瘤在手术后及未手术情况下转移的动力学相近,可以用作手术后及未手术模型。跟其他肿瘤模型相比,由于4T1的抗6-硫鸟嘌噙特性,微小的转移细胞团(少到仅仅1个)也可以在许多远端器官中检测到。
细胞特性
1)来源:小鼠乳腺癌
2)形态:上皮细胞样贴壁生长
3)含量:>1x106细胞数
4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5)用途:仅供科研使用。
二.4T1小鼠乳腺癌细胞的培养
1)准备1640培养基;优质胎牛血清,10%;p/s双抗,1%。
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配
三.4T1小鼠乳腺癌细胞处理:
1)冻存细胞的复苏:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
四、4T1小鼠乳腺癌细胞运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
五、4T1小鼠乳腺癌细胞细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代。
智立中特(武汉)生物科技有限公司是一家集生物研发,生产,销售,售后为一体的高新技术产业公司。拥有载体质粒,载体,国内外微生物菌种资源,感受态细胞,培养基,细胞株等广泛的生产销售线。

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pBI121;pBIFC-bFosVC155;pBIFC-VC15;pCDFDuet-1;pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro;pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro;pBIFC-VN155(I152L)addgene27097;pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro;pCAGGS;pBiFC-VN173(Plasmid#22010);pBluescriptSK(+);pBluescriptIISK(+);pBV220;pCas;pCas9
pBR322;pBT3-STE;pBudCE4.1以及结合转移质粒RP4;pGL4.25[luc2CP/minP];pGR106;pIRES2-AcGFP1-Nuc;psfGFP;pHEN1;pNL1.1[Nluc];pBBR1-GFP;pBMTB-5;pBMTB-4;pBMTB-3;pBMTB-2;pCAMBIA0305.1;pCX-DR;;pGreenII0800-miRNA;pK7GWIWG2(I);pRARE;pDG1663
质粒菌种产品:
E.coliNissle1917;USA300:大肠杆菌JM108;希瓦氏菌属MR-1;E.coliW3110野生型;酿酒酵母W303a;酿酒酵母invsc1;酿酒酵母BY4741;酿酒酵母BY4742;毕赤酵母SMD1168H;PseudomonasputidaKT2440;E.coliMC1061;枯草芽孢杆菌WB800;根癌农杆菌EHA105;根癌农杆菌GV3101;CEN.PK2-1D;CEN.PK2-1C;全耐药鲍曼不动杆菌;哈维弧菌BB170
菌种产品:
提供模式菌种,科研菌种,普通菌种等菌种资源,有证质控样品等微生物标准品,芽孢悬液。常用药典菌种如:大肠埃希氏菌CMCC(B)44102、黑曲霉CMCC(F)98003,白色念珠菌CMCC(F)98001,枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501,铜绿假单胞菌CMCC(B)10104,生孢梭菌CMCC(B)64941;常用益生菌:长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum),嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus),鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus),类干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei),干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei);常用真菌:松口蘑Tricholomamatsutake,灰葡萄孢bio-81601cfcc50437Botrytiscinerea;灵芝,香菇,茯苓等
原代细胞和细胞系产品:
现取不同组织现分:不同来源人/鼠/兔/猪等不同组织如肺、气管、支气管、甲状腺、胰腺、垂体、肾上腺、扁桃体、胸腺、肾、膀胱、输尿管、前列腺、心脏、血管。常用原代细胞有:气管上皮细胞;前列腺上皮细胞;膀胱上皮细胞;输尿管上皮细胞;肾足细胞;内皮祖细胞;输卵管上皮细胞;乳腺上皮细胞
公司提供细胞系人源做过STR鉴定,其他做过种属鉴定,确保产品无误后方可提供客户,形式冻存或复苏节省客户时间;确保实验顺利。常用细胞系有:WB-F344细胞;RG2[D74]细胞;NRK细胞;A7r5细胞;L6细胞;UMNSAH/DF-1细胞;MDBK(NBL-1)细胞;MDBK细胞;CCC-SMC-1细胞;PtK1(NBL-3)细胞;Mv1Lu细胞;Mv.1.Lu(NBL-7)细胞;F81细胞;CRFK细胞;MLTC-1细胞;MS1细胞;C3H/10T1/2,Clone8细胞;GL261细胞;P3X63Ag8.653细胞;HCC38细胞;ZR-75-30细胞;SK-LU-1细胞;NCI-H2087细胞;SK-N-MC细胞;Hs895.T细胞